多肽純化的多種問(wèn)題解答

1. 多肽含量與多肽純度有什么區別？
條多肽產(chǎn)品中除了多肽本身還包括生產(chǎn)過(guò)程中帶入的水份及有機鹽分等雜質(zhì)，多肽純度僅指多肽本身所含肽產(chǎn)品的含量及雜質(zhì)的含量，不包括水份等雜質(zhì)；而多肽含量則是指目標多肽在產(chǎn)品中的凈含量，般以N元素分析或氨基酸分子的方法來(lái)檢測；因此條多肽即使純度達到99%，因為產(chǎn)品中還包含水份及有機鹽分等，它的含量可能也只有70-80%。
2. 如何選擇純化過(guò)程中使用的色譜柱填料？
不同序列的多肽理化性質(zhì)及疏水性有很大的區別，多數情況分子量小于4000和親水性多肽用C18柱分離效果，分子量大于5000和端疏水性的多肽以C4柱分離效果，而C8柱介于C18和C4柱之間，其應用效果與C18柱更相似；對些特殊選擇性的多肽，也可選擇苯基柱和聚合物色譜柱。
3. 在純化過(guò)程中選擇聚合物填料的原則是什么？
需要使用于正常pH或溫度條件進(jìn)行純化時(shí)，可以使用pH范圍寬的聚合物色譜柱，它的點(diǎn)就是在端pH條件下不會(huì )降解，可以使用強酸和強堿作為流動(dòng)相進(jìn)行分離純化。
4. 影響多肽純度檢測結果的因素
影響多肽純度檢測結果的因素很多，主要包括：流動(dòng)相體系、色譜柱型號、柱溫、波長(cháng)及色譜儀的性能指標，每項不同都可能造成結果產(chǎn)生誤差。
5. 反相色譜分離純化后，怎樣去除產(chǎn)品中流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA，乙腈等雜質(zhì)？
凍干的辦法應該可以除去大多數TFA和乙腈，只要不超過(guò)允許范圍，這種辦法是簡(jiǎn)單、有效的。對TFA含量要求更的些**肽凍干的方法般無(wú)法完全達到要求，需要進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的轉鹽或脫鹽。 
6. 多肽般有哪幾種鹽的形式？通過(guò)什么方式轉鹽或脫鹽？
多數多肽都是在TFA體系下分離純化的，所以多肽以TFA鹽的形式多，其次**肽般有醋酸鹽及鹽酸鹽的形式，少數**肽會(huì )有些特殊的鹽形式。轉鹽方式多為離子交換法和HPLC法，而脫鹽可用透析袋和超濾膜。
7. TFA在緩沖液中是不是只起到調節PH的作用？TFA的濃度越基線(xiàn)漂移越厲害，那是不是說(shuō)TFA的濃度在緩沖液PH允許的情況下越低越好？
（1）TFA起到類(lèi)似離子對的作用，般濃度在0.05-0.1%，過(guò)的濃度，會(huì )使溶液偏酸，長(cháng)時(shí)間使用可能影響柱子壽命。
（2）同時(shí)TFA可以抑制硅膠表面硅醇基，改善堿性化合物的峰型。有時(shí)0.1%TFA分離不好的話(huà)?？梢钥紤]加大濃度到0.2%。但要注意用完后及時(shí)沖洗色譜柱。
（3）走梯度時(shí)，因為走成基線(xiàn)漂移，但對制備的影響不大。